微生物學(xué)檢驗標(biāo)準(zhǔn)的更新是食品安全領(lǐng)域風(fēng)險控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。近期我國陸續(xù)發(fā)布了多項食品安全的新標(biāo)準(zhǔn)，其中包括了《GB4789.12-2025 產(chǎn)肉毒毒素梭菌及肉毒毒素檢驗》。本標(biāo)準(zhǔn)與 GB4789.12—2016相比，主要變化如下：

• — 修改了標(biāo)準(zhǔn)名稱;

• — 增加了術(shù)語和定義；

• — 修改了范圍；

• — 增加了梭菌實時熒光PCR鑒定方法；

• — 修改了設(shè)備和材料、培養(yǎng)基和試劑；

• — 修改了檢驗程序、操作步驟、結(jié)果與報告及附錄。

該標(biāo)準(zhǔn)將于2026-03-02實施，因此，下面小編就該標(biāo)準(zhǔn)的主要修訂內(nèi)容進行新舊版本的對比解讀，以便大家盡早做好此新標(biāo)準(zhǔn)實施的應(yīng)對工作。

標(biāo)準(zhǔn)名稱修訂：由《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 肉毒梭菌及肉毒毒素檢驗》變更為《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 產(chǎn)肉毒毒素梭菌及肉毒毒素檢驗》。

范圍修訂：2016版標(biāo)準(zhǔn)適用于“肉毒梭菌"的檢驗；2025版標(biāo)準(zhǔn)適用于“產(chǎn)肉毒毒素梭菌"的檢驗。

新增術(shù)語定義“產(chǎn)肉毒毒素梭菌"：革蘭氏陽性厭氧桿菌，能形成卵圓形芽孢，一般芽孢會大于菌體、位于次端,在適宜培養(yǎng)條件下能產(chǎn)生肉毒毒素的一類細菌的統(tǒng)稱。包含肉毒梭菌(Clostridium botulinum)、丁酸梭菌(Clostridium butyricum)等。

技術(shù)意義：由于近年來發(fā)現(xiàn)，除肉毒梭菌外，其他梭菌，如E型丁酸梭菌等也可產(chǎn)生肉毒毒素， 并引發(fā)食源性肉毒中毒，因此，名稱修改后標(biāo)準(zhǔn)適用性范圍覆蓋肉毒梭菌、丁酸梭菌等產(chǎn)肉毒毒素梭菌檢驗，更科學(xué)更精準(zhǔn)。

變更內(nèi)容

2025版標(biāo)準(zhǔn)進一步“增加了梭菌實時熒光PCR鑒定方法"，并在普通PCR部分提供了更詳細的基因序列位置信息（GenBank編號）。

技術(shù)意義

根據(jù)不同梭菌的全基因組序列，建立了梭菌屬水平、肉毒梭菌和丁酸梭菌種水平鑒定用熒光PCR方法，實現(xiàn)了對“產(chǎn)肉毒毒素梭菌"的精準(zhǔn)菌種鑒定。

針對毒素基因分型檢測，可使用環(huán)凱肉毒梭菌A/B型毒素基因PCR檢測試劑盒（KJD06P）和肉毒梭菌E/F型毒素基因PCR檢測試劑盒（KJD07P）。

變更內(nèi)容

1. 新增生理鹽水。

2. 新增哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基。

3. 修改“10%胰蛋白酶溶液"改為“胰蛋白酶：1：250 或 0.25%。

4. 新增10×TAE緩沖液。

技術(shù)意義：哥倫比亞血平板結(jié)合卵黃瓊脂，提高了對各類“產(chǎn)肉毒毒素梭菌"的分離成功率，增強了方法的可靠性。

推薦環(huán)凱明膠磷酸鹽緩沖液（027143）或其即用成品（C27143D1）、TPGYT培養(yǎng)基基礎(chǔ)（027147）或TPGYT肉湯管（C27147G1）、即用型庖肉培養(yǎng)基（含鐵粉）（C27140G2）、哥倫比亞血平板 （CP0160）、厭氧卵黃瓊脂基礎(chǔ)（027165）+50%卵黃乳液（029250）。

變更內(nèi)容

1. 流程圖將固態(tài)、半固態(tài)、液體樣品的rou毒素檢驗方法合并。

2. 調(diào)整了皰肉培養(yǎng)基、卵黃瓊脂平板的培養(yǎng)溫度從35℃±1℃調(diào)整為36℃±1℃，并將皰肉培養(yǎng)基、TPGYT的培養(yǎng)時間在5d培養(yǎng)后培養(yǎng)基無菌生長應(yīng)延長培養(yǎng)至10d體現(xiàn)在了流程圖中。

3. 新增哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基，用于觀察肉毒梭菌的菌落形態(tài)。

4. 新標(biāo)準(zhǔn)中革蘭氏染色和PCR毒素編碼基因檢測后再進行rou毒素檢驗和實時熒光PCR，提升檢驗的精確度，將產(chǎn)rou毒素的梭菌精確到梭菌屬和種，不再局限于肉毒梭菌。

技術(shù)意義：不同形態(tài)的樣品檢測方法合并后，操作方法更為靈活；培養(yǎng)條件36℃±1℃與其他國家標(biāo)準(zhǔn)的微生物培養(yǎng)溫度更為統(tǒng)一。

修訂：2016版“肉毒梭菌檢驗結(jié)果報告"修訂為2025版“產(chǎn)肉毒毒素梭菌檢驗結(jié)果報告"，需報告樣品中未檢出或檢出產(chǎn)某型肉毒毒素的某種梭菌，如：樣品中檢出產(chǎn)E型肉毒毒素的丁酸梭菌。

技術(shù)意義：新增報告不僅能確認樣品中是否存在肉毒毒素風(fēng)險，還能明確產(chǎn)生該毒素的具體菌種和毒素型別，提升溯源價值。

本次修訂將標(biāo)準(zhǔn)名稱修改為“產(chǎn)肉毒毒素梭菌及肉毒毒素檢驗"，通過增加培養(yǎng)基和不同瓊脂培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)描述等，可實現(xiàn)對產(chǎn)rou毒素的肉毒梭菌和丁酸梭菌的有效檢出。

同時，增加了分離菌鑒定用熒光PCR方法，可快速對可疑菌落進行鑒別。通過上述一系列技術(shù)內(nèi)容的修訂，該標(biāo)準(zhǔn)不再僅適用于食品中肉毒梭菌和肉毒毒素檢驗，而是適用于多種產(chǎn)肉毒毒素梭菌和肉毒毒素的檢驗。

該標(biāo)準(zhǔn)可提高食品中產(chǎn)肉毒毒素梭菌及肉毒毒素的檢出能力，為高風(fēng)險食品中產(chǎn)肉毒毒素梭菌及肉毒毒素的風(fēng)險監(jiān)測和評估等風(fēng)險防控工作提供有力技術(shù)支撐。